产品中心
-
-
ENMK06826
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒
-
别名：Linker For Activation Of T-Cell, L-Selectin, Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule 1, Neural cell adhesion molecule ligand 1
-
检测范围：LAT: 0.156-10 ng/mL；L-Sel: 0.78-50 ng/mL；MAdCAM1: 0.156-10 ng/mL；NCAM-L1: 0.156-10 ng/mL
-
灵敏度：LAT: 0.052 ng/mL；L-Sel: 0.26 ng/mL；MAdCAM1: 0.052 ng/mL；NCAM-L1: 0.052 ng/mL
-
规格：96T
-
保存条件：-20℃保存（短期储存可在4℃条件下进行，例如约2周）
-
用途：用于体外定量测定样本中大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1的含量
-
应用：Multiplex
说明书下载
-
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒组分
|
内容
|
96T
|
48T
|
保存
|
|
预包被板
|
8×12
|
8×6
|
4℃/-20℃
|
|
预混标准品
|
2瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
预混生物素化抗体（1:100）
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
酶结合物（1:100）
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
酶稀释液
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
抗体稀释液
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
标准品稀释液
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
样本稀释液
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
洗涤缓冲液（1:25）
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
显色剂A
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
显色剂B
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
显色剂C
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃/-20℃
|
|
说明书
|
1套
|
1套
|
室温
|
注意
RT: 室温；大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 标准品: 冻干；显色液A: 避光保存。
自备器材
- 酶标仪（450nm检测波长滤光片，可选配630nm校正波长滤光片）。
- 洗板机（进液量可调，确保每孔加入350μL且不溢出）。
- 洁净工作台、生物安全柜、通风橱。
- 高精度单道移液器（量程0.5-10μL、20-200μL、200-1000μL）。
- 高精度多道移液器（8道或12道，量程50-300μL）。
- 37℃恒温箱。
- 低温离心机。
- 冰箱（4℃、-20℃、-86℃）。
- 分析天平。
- 剪刀、镊子、钳子等。
- 板式混匀器、低频振荡器等。
其他自备材料
- 离心管（容量1.5 mL、5 mL等）。
- 一次性移液器吸头（量程0.5-10 μL、20 μL、20-200 μL、200-1000 μL）。
- 纯水或蒸馏水。
- 坐标纸。
- 吸水纸。
样本采集与制备
样本制备
01.血清
将采集的全血置于4℃冰箱中过夜。然后以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液，立即检测或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
02.血浆
取已加入EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂的血浆。充分混匀。以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
03.组织匀浆
取已在0.01 M PBS中洗涤过的组织切片，然后按1 g组织比5-10 mL的比例加入组织蛋白提取试剂，在冰浴中混匀。充分匀浆后，以5000-10000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
04.细胞培养
以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
05.尿液、腹水、脑脊液等
以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
注意事项
采血管应无热原和无内毒素。
不建议使用溶血或高脂血症标本。
样本最终应呈现澄清且基本透明。所有颗粒物均应通过离心去除。
如果采集的样本不立即使用，应按单次使用量分装，并在-20/-80℃下冷冻保存，务必避免反复冻融。
为使样本在标准曲线范围内获得适当的检测分辨率，通常需要对样本进行稀释优化。始终建议在批量检测样本之前进行预实验，以确定是否需要对样本进行优化稀释。
建议采集足量样本以进行多次检测，因为有时部分用户可能会遇到一些问题而导致数据丢失。
在采集/处理样本时，务必穿戴防护外套（如戴手套、穿防护服、佩戴口罩/呼吸器等），并了解处理标本所涉及的所有潜在风险。
样本处理应在维护良好的生物安全柜内进行。
实验准备
建议用户充分了解其样本预期浓度的大致范围。我们建议查阅学术文献中类似样本浓度的参考文献，然后据此考虑对样本进行适当稀释。
请提前20分钟将ELISA试剂盒从冰箱中取出，待其恢复至室温后即可开始检测。
用双蒸水稀释浓缩洗涤缓冲液（1:25）。未用完的部分放回盒中。
标准品：向冻干标准品瓶中加入1.0 mL标准品稀释液，静置30分钟。待标准品完全溶解后，轻轻混匀，并在管上贴上标签。
标准品稀释步骤：取7支洁净试管，分别标注其预期浓度（STD2、STD3、STD4、STD5、STD6、STD7、STD8）。每管加入300 μL标准品稀释液。从复溶后的STD1中吸取300 μL加入标注为STD2的管中，混匀。然后从STD2管中吸取300 μL加入STD3管中，混匀。重复此操作直至STD7管。STD8管中的标准品稀释液作为阴性对照。
复溶后的标准品母液不可重复使用。
生物素化抗体：根据拟检测的孔数取出相应体积的生物素化抗体溶液，按1:100的比例用抗体稀释液稀释。应提前30分钟配制，我们绝对建议不要重复用于其他检测。
酶结合物：根据拟检测的孔数取出相应量的酶结合物溶液，按1:100的比例用酶稀释液稀释。应提前30分钟配制，我们绝对建议不要重复用于其他检测。
显色剂：提前30分钟配制显色剂溶液，将显色剂A和显色剂B按9:1的体积比混合。
实验步骤
实验步骤
结果计算
以标准品浓度值为X坐标，OD读数为Y坐标。也可以取对数，双对数或者半对数绘图。用平滑线连接标准品各坐标点。将样本OD值代入标准曲线方程，即可求出样本浓度。建议使用专业曲线软件（如curve expert 1.3）对结果进行分析和计算。
性能指标
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒典型数据
|
典型数据
|
标准品1
|
标准品2
|
标准品3
|
标准品4
|
标准品5
|
标准品6
|
标准品7
|
标准品8
|
|
LAT, ng/mL
|
10
|
5
|
2.5
|
1.25
|
0.625
|
0.313
|
0.156
|
0
|
|
LAT吸光值
|
3.133
|
1.741
|
0.957
|
0.553
|
0.301
|
0.163
|
0.093
|
0.059
|
|
L-Sel, ng/mL
|
50
|
25
|
12.5
|
6.25
|
3.125
|
1.563
|
0.781
|
0
|
|
L-Sel吸光值
|
2.839
|
1.562
|
0.877
|
0.477
|
0.276
|
0.152
|
0.083
|
0.056
|
|
MAdCAM1, ng/mL
|
10
|
5
|
2.5
|
1.25
|
0.625
|
0.313
|
0.156
|
0
|
|
MAdCAM1吸光值
|
2.709
|
1.521
|
0.827
|
0.483
|
0.258
|
0.146
|
0.079
|
0.053
|
|
NCAM-L1, ng/mL
|
10
|
5
|
2.5
|
1.25
|
0.625
|
0.313
|
0.156
|
0
|
|
NCAM-L1吸光值
|
3.726
|
2.07
|
1.185
|
0.658
|
0.344
|
0.193
|
0.111
|
0.071
|
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒标准曲线
标准曲线
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒线性
为评估该检测方法的线性，将样本加入高浓度的大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1进行加标，并用相应的校准品稀释液稀释，制备出测定值处于该检测方法动态范围内的样本。
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒回收率
通过对多种基质在检测范围内进行三个不同水平的加标，评估了大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1的回收率。
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒回收率
|
基质
|
范围 %
|
平均值% 回收率
|
|
血清(n=5)
|
85-93
|
89
|
|
EDTA 血浆(n=5)
|
88-100
|
94
|
|
细胞培养上清(n=5)
|
94-107
|
100.5
|
大鼠 LAT, L-Sel, MAdCAM1, NCAM-L1 多因子ELISA试剂盒精密度
批内精密度（实验内精密度）将三份已知浓度的样本在同一块酶标板上重复检测 20 次，以评估批内精密度。 批间精密度（实验间精密度）将三份已知浓度的样本在 20 次独立实验中分别检测，以评估批间精密度。实验由至少两名技术人员使用两个批次的试剂组分完成。
|
批内精密度
|
批间精密度
|
|||||
|
样品
|
1
|
2
|
3
|
1
|
2
|
3
|
|
n
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
|
CV%
|
6.3
|
6.7
|
6.7
|
7.6
|
8.8
|
8.1
|
结果判定
1.每个样本和标准品的OD值都应通过减去空白孔的OD值进行校正。
2.手工绘制标准曲线：以标准品浓度为X轴，相应的OD值为Y轴绘制标准曲线。用平滑曲线连接各绘制点。将样本OD值代入标准曲线方程，即可计算样本浓度。建议使用专业曲线拟合软件（如Curve Expert 1.3）进行结果分析和计算。
3.如果样本OD值高于标准曲线中最高浓度标准品的OD值，则应对样本进行稀释（或进一步稀释）并重新检测。计算最终浓度时，将测得浓度乘以稀释倍数。
注意事项
-
01复溶后的标准品一经配制即不可再次保存，因此请不要在复溶后尝试重新冷冻。
-
02由于运输过程中的振荡/颠倒，可能需要对试剂盒的试管/瓶进行离心，以使内容物聚集。试管应手动振荡或以1000 rpm离心1分钟，使所有内容物沉至底部。
-
03浓缩洗涤缓冲液可能会轻微结晶。在稀释过程中可用水浴帮助溶解。配制洗涤缓冲液时，结晶必须完全溶解。
-
04配制好的标准品仅供单次使用，因此请不要尝试重复使用已检测过的标准品。如再次进行检测，请使用提供的第二瓶标准品。
-
05仅使用本试剂盒直接配备的试剂/组分。请勿与其他订单批次/批号的本试剂盒或不同试剂盒混合使用。
-
06确保试剂充分混匀。对于微孔板中的试剂，充分混匀对于获得准确的检测结果尤为重要。建议使用微量振荡器（最低频率）。如无微量振荡器，请手动轻微画圈振荡微孔板1分钟，以确保各孔充分混匀。
-
07请确保在开始检测前将试剂盒恢复至室温。
-
08标准品始终建议进行双复孔或三复孔检测。
-
09将未使用的微孔板条放入铝箔袋中，于2-8℃保存（如果您打算在较短时间内使用这些板条）。
-
10显色剂对光敏感，因此请避免暴露于光照下。
-
11已过有效期的试剂盒不应使用。
-
12使用双波长时，波长应设置为450nm和630nm。
-
13所有样本、洗涤缓冲液和废弃物均应作为生物废弃物处理。显色剂C为1M硫酸，使用时请密切关注安全。
-
14加样应始终通过移液器或类似仪器进行。在开始检测前校准仪器，以避免实验误差。请快速将样本加入孔中，建议将加样时间控制在约5分钟以内。如果有助于缩短加样时间，您可以考虑使用多道移液器。
-
15请勿重复使用粘性封板膜。如果每次只使用部分板条，请将其裁剪至合适大小。使用后务必丢弃。
-
16每次新进行检测时，均应制作新的标准曲线。如果检测样本的观测浓度过高（样本OD值高于标准品最高浓度孔的OD值），请按一定倍数稀释，并在最终计算中校正该倍数。
-
17含有NaN3的样本不能检测，因为NaN3会抑制辣根过氧化物酶（HRP）的活性。
-
18使用洗板机洗板时，每孔注入的缓冲液体积应略多于350μL。确保采样头未卡住或堵塞。此外，如手工洗板，请在使用吸水材料去除多余水分时注意——确保该吸水材料未用于清洁任何其他试剂，以防止污染。
-
19显色剂C终止显色反应后，请在10分钟内读取OD值。
-
20如果进行了双复孔检测，应使用各孔的平均值。
-
21溶血样本可能导致假阳性结果，因此我们认为这些样本与本试剂盒不兼容。
-
22检测过程中，请尽量将湿度控制在约60%。
-
23我们建议定期检查恒温器和校准情况，以确认孵育温度稳定保持在37℃。