产品中心
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ENMK06707
大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒
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别名：Liver/kidney microsomal autoAntibody, Metanephrine, Microalbuminuria, Nephrin
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检测范围：LKM: 0.5-32 ng/mL；MN: 0.156-10 ng/mL；MAU: 0.156-10 ng/mL；NPHN: 0.156-10 ng/mL
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灵敏度：LKM: 0.167 ng/mL；MN: 0.052 ng/mL；MAU: 0.052 ng/mL；NPHN: 0.052 ng/mL
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规格：96T
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保存条件：-20℃保存（短期储存可在4℃条件下进行，例如约2周）
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用途：用于体外定量测定样本中大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN的含量
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应用：Multiplex
说明书下载
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大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒组分
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内容
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96T
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48T
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保存
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预包被板
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8×12
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8×6
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4℃/-20℃
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预混标准品
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2瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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预混生物素化抗体（1:100）
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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酶结合物（1:100）
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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酶稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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抗体稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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标准品稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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样本稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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洗涤缓冲液（1:25）
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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显色剂A
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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显色剂B
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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显色剂C
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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说明书
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1套
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1套
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室温
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注意
RT: 室温；大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 标准品: 冻干；显色液A: 避光保存。
自备器材
- 酶标仪（450nm检测波长滤光片，可选配630nm校正波长滤光片）。
- 洗板机（进液量可调，确保每孔加入350μL且不溢出）。
- 洁净工作台、生物安全柜、通风橱。
- 高精度单道移液器（量程0.5-10μL、20-200μL、200-1000μL）。
- 高精度多道移液器（8道或12道，量程50-300μL）。
- 37℃恒温箱。
- 低温离心机。
- 冰箱（4℃、-20℃、-86℃）。
- 分析天平。
- 剪刀、镊子、钳子等。
- 板式混匀器、低频振荡器等。
其他自备材料
- 离心管（容量1.5 mL、5 mL等）。
- 一次性移液器吸头（量程0.5-10 μL、20 μL、20-200 μL、200-1000 μL）。
- 纯水或蒸馏水。
- 坐标纸。
- 吸水纸。
样本采集与制备
样本制备
01.血清
将采集的全血置于4℃冰箱中过夜。然后以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液，立即检测或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
02.血浆
取已加入EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂的血浆。充分混匀。以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
03.组织匀浆
取已在0.01 M PBS中洗涤过的组织切片，然后按1 g组织比5-10 mL的比例加入组织蛋白提取试剂，在冰浴中混匀。充分匀浆后，以5000-10000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
04.细胞培养
以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
05.尿液、腹水、脑脊液等
以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
注意事项
采血管应无热原和无内毒素。
不建议使用溶血或高脂血症标本。
样本最终应呈现澄清且基本透明。所有颗粒物均应通过离心去除。
如果采集的样本不立即使用，应按单次使用量分装，并在-20/-80℃下冷冻保存，务必避免反复冻融。
为使样本在标准曲线范围内获得适当的检测分辨率，通常需要对样本进行稀释优化。始终建议在批量检测样本之前进行预实验，以确定是否需要对样本进行优化稀释。
建议采集足量样本以进行多次检测，因为有时部分用户可能会遇到一些问题而导致数据丢失。
在采集/处理样本时，务必穿戴防护外套（如戴手套、穿防护服、佩戴口罩/呼吸器等），并了解处理标本所涉及的所有潜在风险。
样本处理应在维护良好的生物安全柜内进行。
实验准备
建议用户充分了解其样本预期浓度的大致范围。我们建议查阅学术文献中类似样本浓度的参考文献，然后据此考虑对样本进行适当稀释。
请提前20分钟将ELISA试剂盒从冰箱中取出，待其恢复至室温后即可开始检测。
用双蒸水稀释浓缩洗涤缓冲液（1:25）。未用完的部分放回盒中。
标准品：向冻干标准品瓶中加入1.0 mL标准品稀释液，静置30分钟。待标准品完全溶解后，轻轻混匀，并在管上贴上标签。
标准品稀释步骤：取7支洁净试管，分别标注其预期浓度（STD2、STD3、STD4、STD5、STD6、STD7、STD8）。每管加入300 μL标准品稀释液。从复溶后的STD1中吸取300 μL加入标注为STD2的管中，混匀。然后从STD2管中吸取300 μL加入STD3管中，混匀。重复此操作直至STD7管。STD8管中的标准品稀释液作为阴性对照。
复溶后的标准品母液不可重复使用。
生物素化抗体：根据拟检测的孔数取出相应体积的生物素化抗体溶液，按1:100的比例用抗体稀释液稀释。应提前30分钟配制，我们绝对建议不要重复用于其他检测。
酶结合物：根据拟检测的孔数取出相应量的酶结合物溶液，按1:100的比例用酶稀释液稀释。应提前30分钟配制，我们绝对建议不要重复用于其他检测。
显色剂：提前30分钟配制显色剂溶液，将显色剂A和显色剂B按9:1的体积比混合。
实验步骤
实验步骤
结果计算
以标准品浓度值为X坐标，OD读数为Y坐标。也可以取对数，双对数或者半对数绘图。用平滑线连接标准品各坐标点。将样本OD值代入标准曲线方程，即可求出样本浓度。建议使用专业曲线软件（如curve expert 1.3）对结果进行分析和计算。
性能指标
大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒典型数据
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典型数据
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标准品1
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标准品2
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标准品3
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标准品4
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标准品5
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标准品6
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标准品7
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标准品8
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LKM, ng/mL
|
32
|
16
|
8
|
4
|
2
|
1
|
0.5
|
0
|
|
LKM吸光值
|
2.259
|
1.23
|
0.704
|
0.399
|
0.224
|
0.117
|
0.068
|
0.045
|
|
MN, ng/mL
|
10
|
5
|
2.5
|
1.25
|
0.625
|
0.313
|
0.156
|
0
|
|
MN吸光值
|
3.128
|
1.636
|
0.937
|
0.511
|
0.298
|
0.156
|
0.087
|
0.06
|
|
MAU, ng/mL
|
10
|
5
|
2.5
|
1.25
|
0.625
|
0.313
|
0.156
|
0
|
|
MAU吸光值
|
3.193
|
1.756
|
0.947
|
0.532
|
0.286
|
0.164
|
0.094
|
0.062
|
|
NPHN, ng/mL
|
10
|
5
|
2.5
|
1.25
|
0.625
|
0.313
|
0.156
|
0
|
|
NPHN吸光值
|
3.34
|
1.892
|
1.011
|
0.573
|
0.312
|
0.173
|
0.097
|
0.063
|
大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒标准曲线
标准曲线
大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒线性
为评估该检测方法的线性，将样本加入高浓度的大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN进行加标，并用相应的校准品稀释液稀释，制备出测定值处于该检测方法动态范围内的样本。
大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒回收率
通过对多种基质在检测范围内进行三个不同水平的加标，评估了大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN的回收率。
大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒回收率
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基质
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范围 %
|
平均值% 回收率
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|
血清(n=5)
|
83-93
|
88
|
|
EDTA 血浆(n=5)
|
88-95
|
91.5
|
|
细胞培养上清(n=5)
|
93-106
|
99.5
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大鼠 LKM, MN, MAU, NPHN 多因子ELISA试剂盒精密度
批内精密度（实验内精密度）将三份已知浓度的样本在同一块酶标板上重复检测 20 次，以评估批内精密度。 批间精密度（实验间精密度）将三份已知浓度的样本在 20 次独立实验中分别检测，以评估批间精密度。实验由至少两名技术人员使用两个批次的试剂组分完成。
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批内精密度
|
批间精密度
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样品
|
1
|
2
|
3
|
1
|
2
|
3
|
|
n
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
|
CV%
|
6.8
|
6.7
|
6.1
|
8.9
|
8
|
8.5
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结果判定
1.每个样本和标准品的OD值都应通过减去空白孔的OD值进行校正。
2.手工绘制标准曲线：以标准品浓度为X轴，相应的OD值为Y轴绘制标准曲线。用平滑曲线连接各绘制点。将样本OD值代入标准曲线方程，即可计算样本浓度。建议使用专业曲线拟合软件（如Curve Expert 1.3）进行结果分析和计算。
3.如果样本OD值高于标准曲线中最高浓度标准品的OD值，则应对样本进行稀释（或进一步稀释）并重新检测。计算最终浓度时，将测得浓度乘以稀释倍数。
注意事项
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01复溶后的标准品一经配制即不可再次保存，因此请不要在复溶后尝试重新冷冻。
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02由于运输过程中的振荡/颠倒，可能需要对试剂盒的试管/瓶进行离心，以使内容物聚集。试管应手动振荡或以1000 rpm离心1分钟，使所有内容物沉至底部。
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03浓缩洗涤缓冲液可能会轻微结晶。在稀释过程中可用水浴帮助溶解。配制洗涤缓冲液时，结晶必须完全溶解。
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04配制好的标准品仅供单次使用，因此请不要尝试重复使用已检测过的标准品。如再次进行检测，请使用提供的第二瓶标准品。
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05仅使用本试剂盒直接配备的试剂/组分。请勿与其他订单批次/批号的本试剂盒或不同试剂盒混合使用。
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06确保试剂充分混匀。对于微孔板中的试剂，充分混匀对于获得准确的检测结果尤为重要。建议使用微量振荡器（最低频率）。如无微量振荡器，请手动轻微画圈振荡微孔板1分钟，以确保各孔充分混匀。
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07请确保在开始检测前将试剂盒恢复至室温。
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08标准品始终建议进行双复孔或三复孔检测。
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09将未使用的微孔板条放入铝箔袋中，于2-8℃保存（如果您打算在较短时间内使用这些板条）。
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10显色剂对光敏感，因此请避免暴露于光照下。
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11已过有效期的试剂盒不应使用。
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12使用双波长时，波长应设置为450nm和630nm。
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13所有样本、洗涤缓冲液和废弃物均应作为生物废弃物处理。显色剂C为1M硫酸，使用时请密切关注安全。
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14加样应始终通过移液器或类似仪器进行。在开始检测前校准仪器，以避免实验误差。请快速将样本加入孔中，建议将加样时间控制在约5分钟以内。如果有助于缩短加样时间，您可以考虑使用多道移液器。
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15请勿重复使用粘性封板膜。如果每次只使用部分板条，请将其裁剪至合适大小。使用后务必丢弃。
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16每次新进行检测时，均应制作新的标准曲线。如果检测样本的观测浓度过高（样本OD值高于标准品最高浓度孔的OD值），请按一定倍数稀释，并在最终计算中校正该倍数。
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17含有NaN3的样本不能检测，因为NaN3会抑制辣根过氧化物酶（HRP）的活性。
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18使用洗板机洗板时，每孔注入的缓冲液体积应略多于350μL。确保采样头未卡住或堵塞。此外，如手工洗板，请在使用吸水材料去除多余水分时注意——确保该吸水材料未用于清洁任何其他试剂，以防止污染。
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19显色剂C终止显色反应后，请在10分钟内读取OD值。
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20如果进行了双复孔检测，应使用各孔的平均值。
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21溶血样本可能导致假阳性结果，因此我们认为这些样本与本试剂盒不兼容。
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22检测过程中，请尽量将湿度控制在约60%。
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23我们建议定期检查恒温器和校准情况，以确认孵育温度稳定保持在37℃。