产品中心
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ENMK07102
小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒
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别名：Tumor angiogenesis factor, Tumor marker DR-70 for lung cancer, Tumor Necrosis Factor Alpha, Tumor Necrosis Factor Beta
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检测范围：TAF: 0.78-50 ng/mL；DR-70TM: 0.78-50 ng/mL；TNF-α: 7.8-500 pg/mL；TNF-β: 7.8-500 pg/mL
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灵敏度：TAF: 0.26 ng/mL；DR-70TM: 0.26 ng/mL；TNF-α: 2.6 pg/mL；TNF-β: 2.6 pg/mL
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规格：96T
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保存条件：-20℃保存（短期储存可在4℃条件下进行，例如约2周）
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用途：用于体外定量测定样本中小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β的含量
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应用：Multiplex
说明书下载
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小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒组分
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内容
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96T
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48T
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保存
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预包被板
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8×12
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8×6
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4℃/-20℃
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预混标准品
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2瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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预混生物素化抗体（1:100）
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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酶结合物（1:100）
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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酶稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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抗体稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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标准品稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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样本稀释液
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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洗涤缓冲液（1:25）
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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显色剂A
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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显色剂B
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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显色剂C
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1瓶
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1瓶
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4℃/-20℃
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说明书
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1套
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1套
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室温
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注意
RT: 室温；小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 标准品: 冻干；显色液A: 避光保存。
自备器材
- 酶标仪（450nm检测波长滤光片，可选配630nm校正波长滤光片）。
- 洗板机（进液量可调，确保每孔加入350μL且不溢出）。
- 洁净工作台、生物安全柜、通风橱。
- 高精度单道移液器（量程0.5-10μL、20-200μL、200-1000μL）。
- 高精度多道移液器（8道或12道，量程50-300μL）。
- 37℃恒温箱。
- 低温离心机。
- 冰箱（4℃、-20℃、-86℃）。
- 分析天平。
- 剪刀、镊子、钳子等。
- 板式混匀器、低频振荡器等。
其他自备材料
- 离心管（容量1.5 mL、5 mL等）。
- 一次性移液器吸头（量程0.5-10 μL、20 μL、20-200 μL、200-1000 μL）。
- 纯水或蒸馏水。
- 坐标纸。
- 吸水纸。
样本采集与制备
样本制备
01.血清
将采集的全血置于4℃冰箱中过夜。然后以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液，立即检测或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
02.血浆
取已加入EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂的血浆。充分混匀。以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
03.组织匀浆
取已在0.01 M PBS中洗涤过的组织切片，然后按1 g组织比5-10 mL的比例加入组织蛋白提取试剂，在冰浴中混匀。充分匀浆后，以5000-10000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
04.细胞培养
以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
05.尿液、腹水、脑脊液等
以1000-3000 rpm离心10分钟。取上清液立即检测，或将样本置于-20℃/-80℃（1-3个月）保存。
注意事项
采血管应无热原和无内毒素。
不建议使用溶血或高脂血症标本。
样本最终应呈现澄清且基本透明。所有颗粒物均应通过离心去除。
如果采集的样本不立即使用，应按单次使用量分装，并在-20/-80℃下冷冻保存，务必避免反复冻融。
为使样本在标准曲线范围内获得适当的检测分辨率，通常需要对样本进行稀释优化。始终建议在批量检测样本之前进行预实验，以确定是否需要对样本进行优化稀释。
建议采集足量样本以进行多次检测，因为有时部分用户可能会遇到一些问题而导致数据丢失。
在采集/处理样本时，务必穿戴防护外套（如戴手套、穿防护服、佩戴口罩/呼吸器等），并了解处理标本所涉及的所有潜在风险。
样本处理应在维护良好的生物安全柜内进行。
实验准备
建议用户充分了解其样本预期浓度的大致范围。我们建议查阅学术文献中类似样本浓度的参考文献，然后据此考虑对样本进行适当稀释。
请提前20分钟将ELISA试剂盒从冰箱中取出，待其恢复至室温后即可开始检测。
用双蒸水稀释浓缩洗涤缓冲液（1:25）。未用完的部分放回盒中。
标准品：向冻干标准品瓶中加入1.0 mL标准品稀释液，静置30分钟。待标准品完全溶解后，轻轻混匀，并在管上贴上标签。
标准品稀释步骤：取7支洁净试管，分别标注其预期浓度（STD2、STD3、STD4、STD5、STD6、STD7、STD8）。每管加入300 μL标准品稀释液。从复溶后的STD1中吸取300 μL加入标注为STD2的管中，混匀。然后从STD2管中吸取300 μL加入STD3管中，混匀。重复此操作直至STD7管。STD8管中的标准品稀释液作为阴性对照。
复溶后的标准品母液不可重复使用。
生物素化抗体：根据拟检测的孔数取出相应体积的生物素化抗体溶液，按1:100的比例用抗体稀释液稀释。应提前30分钟配制，我们绝对建议不要重复用于其他检测。
酶结合物：根据拟检测的孔数取出相应量的酶结合物溶液，按1:100的比例用酶稀释液稀释。应提前30分钟配制，我们绝对建议不要重复用于其他检测。
显色剂：提前30分钟配制显色剂溶液，将显色剂A和显色剂B按9:1的体积比混合。
实验步骤
实验步骤
结果计算
以标准品浓度值为X坐标，OD读数为Y坐标。也可以取对数，双对数或者半对数绘图。用平滑线连接标准品各坐标点。将样本OD值代入标准曲线方程，即可求出样本浓度。建议使用专业曲线软件（如curve expert 1.3）对结果进行分析和计算。
性能指标
小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒典型数据
|
典型数据
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标准品1
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标准品2
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标准品3
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标准品4
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标准品5
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标准品6
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标准品7
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标准品8
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TAF, ng/mL
|
50
|
25
|
12.5
|
6.25
|
3.125
|
1.563
|
0.781
|
0
|
|
TAF吸光值
|
2.332
|
1.283
|
0.72
|
0.392
|
0.222
|
0.123
|
0.071
|
0.047
|
|
DR-70TM, ng/mL
|
50
|
25
|
12.5
|
6.25
|
3.125
|
1.563
|
0.781
|
0
|
|
DR-70TM吸光值
|
3.507
|
2.008
|
1.127
|
0.632
|
0.354
|
0.187
|
0.105
|
0.069
|
|
TNF-α, pg/mL
|
500
|
250
|
125
|
62.5
|
31.25
|
15.625
|
7.813
|
0
|
|
TNF-α吸光值
|
2.99
|
1.678
|
0.98
|
0.517
|
0.294
|
0.165
|
0.092
|
0.062
|
|
TNF-β, pg/mL
|
500
|
250
|
125
|
62.5
|
31.25
|
15.625
|
7.813
|
0
|
|
TNF-β吸光值
|
2.69
|
1.449
|
0.838
|
0.452
|
0.251
|
0.138
|
0.077
|
0.054
|
小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒标准曲线
标准曲线
小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒线性
为评估该检测方法的线性，将样本加入高浓度的小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β进行加标，并用相应的校准品稀释液稀释，制备出测定值处于该检测方法动态范围内的样本。
小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒回收率
通过对多种基质在检测范围内进行三个不同水平的加标，评估了小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β的回收率。
小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒回收率
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基质
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范围 %
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平均值% 回收率
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血清(n=5)
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84-93
|
88.5
|
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EDTA 血浆(n=5)
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87-102
|
94.5
|
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细胞培养上清(n=5)
|
95-109
|
102
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小鼠 TAF, DR-70TM, TNF-α, TNF-β 多因子ELISA试剂盒精密度
批内精密度（实验内精密度）将三份已知浓度的样本在同一块酶标板上重复检测 20 次，以评估批内精密度。 批间精密度（实验间精密度）将三份已知浓度的样本在 20 次独立实验中分别检测，以评估批间精密度。实验由至少两名技术人员使用两个批次的试剂组分完成。
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批内精密度
|
批间精密度
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样品
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1
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2
|
3
|
1
|
2
|
3
|
|
n
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
|
CV%
|
6.7
|
6.8
|
6
|
8
|
8.4
|
8.6
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结果判定
1.每个样本和标准品的OD值都应通过减去空白孔的OD值进行校正。
2.手工绘制标准曲线：以标准品浓度为X轴，相应的OD值为Y轴绘制标准曲线。用平滑曲线连接各绘制点。将样本OD值代入标准曲线方程，即可计算样本浓度。建议使用专业曲线拟合软件（如Curve Expert 1.3）进行结果分析和计算。
3.如果样本OD值高于标准曲线中最高浓度标准品的OD值，则应对样本进行稀释（或进一步稀释）并重新检测。计算最终浓度时，将测得浓度乘以稀释倍数。
注意事项
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01复溶后的标准品一经配制即不可再次保存，因此请不要在复溶后尝试重新冷冻。
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02由于运输过程中的振荡/颠倒，可能需要对试剂盒的试管/瓶进行离心，以使内容物聚集。试管应手动振荡或以1000 rpm离心1分钟，使所有内容物沉至底部。
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03浓缩洗涤缓冲液可能会轻微结晶。在稀释过程中可用水浴帮助溶解。配制洗涤缓冲液时，结晶必须完全溶解。
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04配制好的标准品仅供单次使用，因此请不要尝试重复使用已检测过的标准品。如再次进行检测，请使用提供的第二瓶标准品。
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05仅使用本试剂盒直接配备的试剂/组分。请勿与其他订单批次/批号的本试剂盒或不同试剂盒混合使用。
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06确保试剂充分混匀。对于微孔板中的试剂，充分混匀对于获得准确的检测结果尤为重要。建议使用微量振荡器（最低频率）。如无微量振荡器，请手动轻微画圈振荡微孔板1分钟，以确保各孔充分混匀。
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07请确保在开始检测前将试剂盒恢复至室温。
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08标准品始终建议进行双复孔或三复孔检测。
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09将未使用的微孔板条放入铝箔袋中，于2-8℃保存（如果您打算在较短时间内使用这些板条）。
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10显色剂对光敏感，因此请避免暴露于光照下。
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11已过有效期的试剂盒不应使用。
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12使用双波长时，波长应设置为450nm和630nm。
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13所有样本、洗涤缓冲液和废弃物均应作为生物废弃物处理。显色剂C为1M硫酸，使用时请密切关注安全。
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14加样应始终通过移液器或类似仪器进行。在开始检测前校准仪器，以避免实验误差。请快速将样本加入孔中，建议将加样时间控制在约5分钟以内。如果有助于缩短加样时间，您可以考虑使用多道移液器。
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15请勿重复使用粘性封板膜。如果每次只使用部分板条，请将其裁剪至合适大小。使用后务必丢弃。
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16每次新进行检测时，均应制作新的标准曲线。如果检测样本的观测浓度过高（样本OD值高于标准品最高浓度孔的OD值），请按一定倍数稀释，并在最终计算中校正该倍数。
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17含有NaN3的样本不能检测，因为NaN3会抑制辣根过氧化物酶（HRP）的活性。
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18使用洗板机洗板时，每孔注入的缓冲液体积应略多于350μL。确保采样头未卡住或堵塞。此外，如手工洗板，请在使用吸水材料去除多余水分时注意——确保该吸水材料未用于清洁任何其他试剂，以防止污染。
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19显色剂C终止显色反应后，请在10分钟内读取OD值。
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20如果进行了双复孔检测，应使用各孔的平均值。
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21溶血样本可能导致假阳性结果，因此我们认为这些样本与本试剂盒不兼容。
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22检测过程中，请尽量将湿度控制在约60%。
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23我们建议定期检查恒温器和校准情况，以确认孵育温度稳定保持在37℃。